蛋白復溶注意事項蛋白復溶:蛋白凍干粉主要分布在西林瓶底部邊緣一圈,如果是運輸過程造成凍干粉脫落散落在瓶子其他位置,建議復溶之前先離心。目前沒有針對西林瓶專用離心機,可將瓶放置在50mL離心管中,用脫脂棉固定,瞬時離心之后再復溶,用移液器吸取適量無菌水(建議按照說明書推薦濃度進行復溶,具體也可根據客戶實際實驗需要,但濃度不宜過高,會導致鹽離子濃度過高影響蛋白的溶解效率和穩定性),直接伸入西林瓶底部,沿西林瓶底部畫一個圈,邊轉邊打出液體,液體全部打出后不要更換槍頭小心吹吸幾下,使均勻分布在瓶底的蛋白凍干粉溶解,然后將復溶后的液體吸出。注意事項:西林瓶膠塞可以打開,打開前瞬時離心,如果沒有無菌和無熱源要求可在外面打開,如果有無菌無熱源要求可在超凈臺打開,如果蛋白產品規格比較小(10ug),溶解時加入水體積小,不建議使用注射器直接注水復溶,會導致針頭中蛋白損失嚴重。
根據是要要求按步驟復溶:
1:判斷實驗周期。短期實驗<=7 天,溶解材料:復溶緩沖液;長期實驗>=7 天,溶解材料:復溶緩沖液、載體蛋白。
2: 開蓋前離心。凍干粉在運輸過程中,會因為外力因素粘附于管壁或者管蓋上,在開蓋之前,先通過離心操作,將凍干粉收集于管底,避免損失和浪費。建議 10,000-12,000 rpm 高速離心 30 s;若沒有高速離心機,3,000-3,500 rpm 離心 5 min。
3: 短期實驗:向凍干粉中加入提供的復溶緩沖液,用槍頭輕輕吹打混勻,重懸至濃度不低于 100 μg/mL。分裝每管不少于 20 μL.
長期實驗:先用復溶緩沖液將蛋白溶解,再用含載體蛋白 (0.1% BSA) 的溶液進一步稀釋,濃度不低于 100 μg/mL,然后分裝凍存于 -20°C 至 -80°C。